Back to Top
Merkezimizdeki C. elegans laboratuvarlarımızda optimize olan ve sürdürülen C. elegans ile ilgili analizler

Nematod Caenorhabditis elegans (C. elegans), biyolojik ve temel tıbbi araştırmalar için popüler bir model haline gelen çok hücreli bir organizmadır. Gelişimsel ve evrimsel süreçler, hücre kaderi spesifikasyonu, kök hücre düzenlemesi, tümörijenez ve yaşlanma dahil olmak üzere biyolojinin birçok yönüyle ilgili temel soruları keşfetmek için bir model sistem olarak yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. C. elegans ayrıca canlı hayvanların yüksek verimli ilaç taraması için, (özellikle onkojenik sinyal yollarını hedefleyen ilaçların fenotipe dayalı yüksek verimli taraması ve terapötik hedeflerin tanımlanması için) ideal bir model sistem olarak kabul edilmiştir çok uygun bir organizma haline getirmiştir, çünkü:

1) dokuları tüm gelişim aşamalarında şeffaftır,

2) in vivo fizyolojik ve hücresel süreçleri incelemek için dokuya özgü floresan transgenik belirteçler iyi oluşturulmuştur,

3) çok sayıda mutant suş mevcuttur,

4) tüm genom dizilimi tamamlanmıştır,

5) kısa bir ömre (20-30 gün) ve güçlü bir genetik yapıya sahiptirler ve

6) memeli hastalıklarının çeşitli yönleri C. elegans'da başarılı bir şekilde modellenebilmektedir.

Nematodlar ve insanlar neredeyse bir milyar yıllık evrimle ayrılmış olsalar da C. elegans homologları, insan genlerinin %60-80'i için tanımlanmıştır ve apoptoz, hücre sinyali, hücre döngüsü, hücre polaritesi, metabolizma ve yaşlanma dahil olmak üzere birçok biyolojik süreç için C. elegans ve memeliler arasında korunmuştur. Ek olarak, genetik çalışmaların uygulanma kolaylığı, gelişimi ve yaşlanmayı düzenleyen yolların genetik olarak aydınlatılmasına katkı sağlamıştır. Dolayısıyla, bu özellikler C. elegans'ı nörodejenerasyon ve kanser dahil çeşitli patolojilerde yer alan genlerin ve yolların aydınlatılmasına sistematik bir yaklaşım sağlayan ideal bir model haline getirmektedir. Bugüne kadar yapılan çalışmalarda C. elegans'ın bu özelliklerinden yararlanan araştırmacılar, spesifik gen mutasyonlarının organizma düzeyinde tümör gelişimi ve sonucu üzerindeki işlevsel etkisini hızlı bir şekilde değerlendirmek ve yeni antikanser ilaçları taramak için C. elegans'ı başarıyla kullanmışlardır. C. elegans üzerine yapılan önemli çalışmalardan bir diğeri de yaşlanma üzerine olmuştur Yaşlanmanın genetik olarak düzenlenebileceğinin keşfedilmesiyle, farmakolojik ve diyet müdahaleleri de dahil olmak üzere model organizmalarda özellikle C. elegans modelinde yaşam süresini uzatmak için çok sayıda strateji kullanılmıştır. Bir diğer ilgi çekici araştırma konusu ise yara iyileşmesidir. Yara iyileşmesi üzerine araştırmalar büyük ölçüde sıçan, fare ve diğer hayvan modellerine dayanmaktadır. Ancak, hayvanların araştırmalarda kullanılmasından kaynaklanan katı etik konulara ilişkin alternatif bir hayvan modelinin sahaya getirilmesi gerekmektedir. Bu bağlamda minyatür bir model nematod olan C. elegans, yara iyileşmesinde araştırmacıların büyük ilgisini çekmektedir. Ayrıca, C. elegans, ozmotik, diyet, oksidatif, hipoksik, ısı ve ağır metal stresi dahil olmak üzere çok çeşitli çevresel etkileri incelemek için popüler bir araştırma modelidir. Ek olarak, Radyasyon biyolojisinde radyasyonun gelişim, hareket, öğrenme ve yaşlanma gibi hayati fonksiyonlar üzerindeki etkileri C. elegans kullanılarak incelenmiştir.

Büyüme, metabolizma, kanser ve yaşlanma çalışmalarında küçük boyutu, büyük kuluçka boyutu, yetiştirme kolaylığı, düşük bakım masrafı, uzun vadeli dondurarak saklama, hızlı üretim süresi, şeffaflık, değişmez hücre sayısı, gelişimi beslemesi yine bu oldukça önemli avantajıdır. Bu bağlamda model organizma olarak sağladığı avantajlar ile hayvan deneylerindeki zorluk, maliyet yüksekliği ve etik kaygılarda göz önünde bulundurulduğunda iyi bir alternatif olarak karşımıza çıkmaktadır. Her solucan birkaç gün içinde 200'den fazla yavru üretebilmektedir, bu nedenle çalışmak için çok fazla malzemeye sahip olmak için çok uzun süre beklemek gerekmemektedir. C. elegans 20-30 gün yaşamaktadır ve tüm somatik hücre bölünmeleri 36 saatlik bir süre içinde gerçekleşmektedir, dolayısıyla gelişimsel biyoloji açısından C. elegans, karmaşık gelişim süreçlerini nispeten kısa bir sürede incelemek için mükemmel bir fırsat sunmaktadır. Her solucanın 1000'den az hücresi vardır; hücre soyu değişmezdir ve tamamen tanımlanmıştır, bu nedenle herhangi bir nedenle işlerin ne zaman ve nerede yanlış gittiğini tam olarak belirlemek mümkündür. Bu, bütün bir organizma içinde tek hücre çözünürlüğünde gelişimi çalışabileceği anlamına gelmektedir. Bu nedenlerle, C. elegans bir model organizma olarak geniş çapta popülerdir.

C. elegans’ın model organizma olarak yetiştirilmesi, sürdürülebilirliği ve stabilizasyonu oldukça önemlidir. Ulusal Sağlık Enstitüleri-Araştırma Altyapı Programları Ofisi (P40 OD010440) tarafından desteklenmekte olan Caenorhabditis Genetics Center’den (CGC, Minnesota Üniversitesi) temin edilen suşlar Sivas Cumhuriyet Üniversitesi İleri Teknoloji Araştırma ve Uygulama Merkezi (CÜTAM) C. elegans laboratuvarlarında (laboratuvarımız bu merkeze kayıtlıdır) Dr. Öğretim Üyesi Şeyda BERK ve öğrencileri tarafından kültürü ve devamlılığı sağlanmış, steril koşullarda dondurulup stoklar oluşturulmuş ve aşağıda belirtilen C. elegans ile ilgili deneyler optimize edilmiştir. Dolayısıyla Sivas Cumhuriyet Üniversitesi İleri Teknoloji Araştırma ve Uygulama Merkezi (CÜTAM) C. elegans laboratuvarları başta üniversitemiz olmak üzere ülkemiz genelinde bilimsel araştırmalar yapmak isteyen araştırmacılar için fırsat sunmaktadır.

 

 

 

Sivas Cumhuriyet Üniversitesi İleri Teknoloji Araştırma ve Uygulama Merkezi (CÜTAM) C. elegans laboratuvarlarımızda optimize olan ve sürdürülen C. elegans ile ilgili analizler:

  1. Sıvı ve katı kültür ortamında C elegans’ların kültürü ve pasajlanması
  2. C. elegans besin kaynağı olarak E. coli OP50 suşu kültür ortamının hazırlanması
  3. Sıvı ve katı kültür ortamında büyüyen C elegans’ların senkronizasyonu
  4. Sıvı ve katı kültür ortamında C elegans’ların dondurulması ve -80°C’de saklanması
  5. Sıvı ve katı kültür ortamında lifespan (ömür uzunluğu) analizleri (ilaç uygulaması)
  6. Sıvı ve katı kültür ortamında fertilizasyon analizleri (ilaç uygulaması)
  7. Gen ekspresyon analizleri için DNA/RNA izolasyonu öncesinde C. elegans’ların uygun koşullarda hazırlanması
  8. Protein ekspresyon analizleri için C. elegans’ların uygun koşullarda hazırlanması
  9. Fertilizasyon ve lifespan analizleri süresince Stereo (Diseksiyon) Mikroskop altında görüntü alma ve fotoğrafların düzenlenmesi
  10. Analiz sonuçlarının Excel programında düzenlenmesi ve Graphad Prism v6 (Graphpad, ABD) istatistiksel programlar kullanılarak grafiklere dönüştürülmesi ve istatistiksel analizler (survival curve analizi)